檢測說明

環二鳥苷單磷酸 (c-di-GMP) 檢測是一種簡單的混合讀取、高選擇性、HTS 就緒檢測，用于測量細胞中的 c-di-GMP 水平。這種均相測定可用于檢測任何產生 c-di-GMP 的生化或酶促反應中的 c-di-GMP，或用于監測細胞內 c-di-GMP 濃度的細胞應用。

測定原理

熒光信號的演變取決于 c-di-GMP 與傳感器中 c-di-GMP 核糖開關的初始結合。這導致菠菜TM適體的穩定，進而結合 DFHBI-1T 以產生熒光。可以使用 GFP/FITC 濾光片組或 482nm 激發和 505nm 發射來測量熒光。

便于使用

c-di-GMP 檢測易于使用且均質。只需將您的樣品與提供的檢測試劑一起孵育 30 分鐘，然后在帶有 FITC/GFP 濾光片或激發波長 482nm 和發射波長 505nm 的熒光讀板機上讀取樣品。

快速響應和良好的信號穩定性

c-di-GMP 傳感器在檢測 c-di-GMP 時會迅速產生信號，因此可以進行快速測量。熒光信號隨著時間的推移是穩定的，因此允許樣品的批處理模式。早在測定設置的 30 分鐘即可獲得出色的 HTS 參數，并在很長一段時間內保持高水平。

寬動態范圍

該檢測即使在 50nM 的 c-di-GMP 下也很靈敏，并且具有寬廣的動態范圍。

選擇性

c-di-GMP 傳感器對 c-di-GMP 具有高度選擇性，不受常見反配體的干擾。

即使與過量 500 – 1,000 倍的反配體（例如 GMP、pGpG 和 c-AMP-GMP）相比，該測定也實現了出色的 HTS 測定參數（Z 因子 >0.9）。

與基于細胞的檢測的兼容性

c-di-GMP 測定可用于以均質形式測量細菌中的細胞內 c-di-GMP 濃度，無需造粒、裂解或洗滌步驟。只需用 BC 試劑補充含有細菌培養物的測定緩沖液，添加傳感器和熒光團，孵育 30 分鐘，然后在熒光閱讀器上讀取。

細菌中的 c-di-GMP 估計

表達野生型 WspR（來自銅綠 假單胞菌的二鳥苷酸環化酶）的大腸桿菌細胞用呋喃西林（抗生素）、二甲基甲酰胺/DMF（載體）處理或不處理（對照）。此外，還以不同的細胞密度接種細菌以模擬不同的 c-di-GMP 水平。在 96 孔板中生長的細菌細胞中的 Cyclic-di-GMP 濃度在沒有任何沉淀、洗滌、裂解或有機提取的情況下進行測量。

c-di-GMP 標準曲線

抗生素或載體的存在不影響 c-di-GMP 測定的性能。

WT WspR 細胞中的 c-di-GMP 估計

c-di-GMP 測定顯示細菌中 c-di-GMP 濃度的變化，以響應抗生素處理和不同細菌細胞密度。

該產品被引用于：

凝聚素通過控制表型程序對銅綠假單胞菌角膜毒力至關重要。趙和等。生物Rxiv。2021。